Oriscience Fast Endo-Free Plasmid Maxi Extraction Kit是一種用于大量無內毒素質粒快速抽提的離心柱式試劑盒。一次提取可以提取500 μg-1.5 mg質粒并且采用了先進的內毒素吸附緩沖液(Binding Buffer),能有效去除質粒中的內毒素污染,純化的質粒中內毒素含量小于0.1 EU/µg,可大大提高轉染實驗效率。本試劑盒無需使用有毒的苯酚、氯仿等試劑、無需乙醇沉淀、操作時間短,可在60 min之內完成。提取的質粒內毒素含量極低且純凈度高,可直接用于轉染、酶切、PCR、轉化、測序等各種實驗。
RNase,-20℃保存。其他組分,室溫(15-25℃)保存。
1. 首次使用前請短暫離心RNase,按試劑瓶標簽提示將RNase加入Solution I 中,于2-8℃保存。
2. 首次使用Wash Buffer I前按試劑瓶標簽提示加入異丙醇,于室溫保存。
3. 首次使用Wash Buffer II前按試劑瓶標簽提示加入無水乙醇,于室溫保存。
4. 溫度較低時,Solution II可能會有沉淀產生,如有沉淀,37℃水浴加熱溶解混勻后使用。
5. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。
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Q1. 低產量或無DNA
a. 培養的細菌沒有轉化相應的質粒DNA或細菌培養條件不正確或者菌液量少。挑選確定含有轉化質粒DNA的細菌進行培養,并確認細菌培養條件。
b. 細菌保存時間過長。細菌在甘油凍存液中保存時間較長,常會出現質粒丟失的現象,可以重新劃平板,挑取含質粒的單菌落或重新轉化。
c. Solution II出現沉淀。置于37℃溶解,混勻后再使用。
d. Wash Buffer I或Wash Buffer II沒有添加異丙醇或無水乙醇。確認是否添加正確體積的異丙醇或無水乙醇。
Q2. 質粒DNA污染
a. 加入Solution II后劇烈震蕩導致基因組DNA降解。加入Solution II后輕柔混勻,不可劇烈震蕩或使用渦旋儀。
b. 裂解時間過長。Solution II加入后立即混勻,裂解時間不要超過5 min。